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威斯尼人app官网_背景介绍来自微生物的耐高温脂肪酶通常在大肠杆菌中过量表达。然而,这些酶通常不存在,酶活性低,并且主要不以包涵体的形式存在。

一些研究认为,其N端与信号肽的融合以及重组蛋白的粘液传递可以有效解决这一问题。一般来说,这种方法的可行性与信号肽的粘液途径和待粘液的靶蛋白类型有很大不同。

中国农业科学院张维庆等在《MicrobialCellFactoriesMicrobialCellFactories》 (if=4.402,工程技术2区)发表了一篇题为《发展有效系统表达绿色潜力》的文章。“信号肽的大肠杆菌比较和优化:表达荧光假单胞菌bj-10热稳定脂肪酶的研究”。本研究对荧光假单胞菌bj-10的高效粘液耐热脂肪酶lipBJ10的信号肽进行了优化。

同时,从粘液溶解性和活性脂肪酶方面对该方法和细胞质粘液法进行了研究。本文报道的结果可为其他脂肪酶的高层交流提供参考。02方法1中使用的主要方法。双星胆碱能蛋白定量(BCA) 2。

动态定量分析3。形态分析03。

文章主要内容概述摘要:摘要脂肪酶(E.C.3.1.1.3)能催化长链三酰甘油的水解,并在水介质中释放长链脂肪酸和甘油。由于大多数脂肪酶的热稳定性差以及野生型菌株产生的脂肪酶产量低,因此对耐寒和耐高温的微生物脂肪酶的需求很大。本文根据之前获得的脂肪酶进行实验,但该脂肪酶的溶解性较好,因此构建了6株负载不同融合传递质粒的菌株。

通过比较这6个菌株的性能,确定了最佳信号序列,并测试了合适的蛋白信号肽(DsbA)以增强可溶性蛋白的传递。指出6种信号肽即PelB和5种天然大肠杆菌信号肽的融合传递比非融合传递能产生威斯尼人app下载更好的可溶性和功能性重组lipBJ10。与这6种不同信号肽融合的重组lipBJ10可以在大肠杆菌中粘液化为周质。

融合通信的总脂肪酶活性低于非融合通信。lipBJ10与DsbA融合时,比较活性超过峰值,产生的蛋白活性是融合蛋白的73.3倍。在DsbA中作为融合伴侣时,活性最低(265.41 U/mL),包涵体组成最高。

在某种程度上,其他四种大肠杆菌信号肽不会引起低活性和非水溶液的包涵体。因此,DsbA是与lipBJ10融合的最佳信号肽伴侣,可有效产生可溶性功能蛋白。

与未融合蛋白lipBJ10相比,与这些信号肽融合的信号肽,尤其是DsbA,可以显著增加包涵体的组成,增强lipBJ10的功能和溶解性。|威斯尼人app官网。

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